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蛋白質組學分析（iTRAQ）
作者:管理 發布時間:2022-06-24 14:01:06
同位素標記相對和絕對定量（isobaric tags for relative and absolute quantification，iTRAQ）技術由AB SCIEX公司研發的一種體外同種同位素標記的相對與絕對定量技術。該技術利用多種同位素試劑標記蛋白多肽N末端或賴氨酸側鏈基團，經高精度質譜儀串聯分析，可同時比較多達8種樣品之間的蛋白表達量，是近年來定量蛋白質組學常用的高通量篩選技術。
iTRAQ 技術采用4種或8種同位素編碼的標簽，通過特異性標記多肽的氨基基團，而后進行串聯質譜分析，可同時比較4種或8種不同樣品中蛋白質的相對含量或絕對含量。
將蛋白質裂解為肽段，然后用iTRAQ試劑進行差異標記。由于iTRAQ試劑是等量的，即不同同位素在標記同一多肽后在第一級質譜檢測，分子量完全相同，用串聯質譜方法對在第一級質譜檢測到前體離子（precursor ion）進行碰撞誘導解離，產物離子通過第二級質譜進行分析。在二級質譜分析過程中，報告基團、質量平衡基團和多肽反應基團之間的鍵斷裂，質量平衡基團丟失，產生低質荷比（m/z）的報告離子。由于二級質譜可分析相對分子質量相差1的報告基團，不同報告基團離子強度的差異就代表了它所標記的多肽的相對豐度。同時，多肽內的酰胺鍵斷裂，形成一系列b離子和y離子，得到離子片段的質量數，通過數據庫查詢和比較，可以鑒定出相應的蛋白質前體。
