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載體構建與定點突變
作者:管理 發布時間:2022-06-23 16:58:42
載體構建：將特定序列（如基因CDS區，miRNA，lncRNA等）進行克隆獲得，并將其構入特定的表達載體（pcDNA3.0等），在轉染劑的輔助下，將載體轉染進入細胞，實現在宿主細胞內目的片段大量表達而實現的過表達的過程。
定點突變：根據設計的要求合成覆蓋突變位點的雙向引物，通過PCR向目的DNA片段中引入所需的變化，如堿基的插入、刪除、替換等，改變對應的氨基酸序列和蛋白質結構和功能。定點突變能迅速、高效的提高DNA所表達的目的蛋白的性狀及表征，是基因研究工作中一種非常有用的手段。 實驗原理：PCR介導的定點突變是指通過聚合酶鏈式反應（PCR）等方法向目的DNA片段（可以是基因組，也可以是質粒）中引入所需變化（通常是表征有利方向的變化），包括堿基的添加、刪除、點突變等。定點突變能迅速、高效的提高DNA所表達的目的蛋白的性狀及表征，是基因研究工作中一種非常有用的手段。
