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引物設(shè)計(jì)與合成
作者:管理 發(fā)布時(shí)間:2022-06-23 16:38:26
采用Oligo 6和Primer Premier 5.0進(jìn)行引物設(shè)計(jì)。引物設(shè)計(jì)主要參考以下原則：
1）引物最好在模板cDNA的保守區(qū)內(nèi)設(shè)計(jì)。
2）引物長度一般在15-30堿基之間。
3）G+C含量：應(yīng)在40%-60%之間，PCR擴(kuò)增中的復(fù)性溫度一般較Tm值低等于引物的Tm值減去5-10°C。引物長度小于20 bp時(shí)，其Tm恒等于4×（G+C）+2×（(A+T）
4）引物3’端要避開密碼子的第3位。
5）引物3’端不能選擇A，最好選擇T。
6）堿基要隨機(jī)分布。
7）引物自身及引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列。
8）引物的5’端可以修飾，而3’端不可修飾。
9）擴(kuò)增產(chǎn)物的單鏈不能形成二級(jí)結(jié)構(gòu)。
10）引物應(yīng)具有特異性。
